上海市自然科学基金(09ZR1425800)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 结核特异性抗体结合肽的筛选研究被引量：3
- 2011年
- 目的 利用纯化的结核病患者血清IgG从噬菌体展示随机7肽库中筛选结核特异性抗体结合肽,为下一步开发新的结核病血清学检测试剂提供思路.方法 以纯化后结核病患者血清IgG作为固相配基,按吸附、洗脱、扩增的生物淘洗（简称淘选）过程对噬菌体展示随机7肽库进行筛选,并于第2至3轮的筛选中加入纯化后健康人血清IgG进行反筛,经过3轮淘选使噬菌体得到富集,分别从滴度测定平板上各个方位挑取结核病患者IgG和健康人IgG洗脱单噬菌体各20个进行扩增纯化,提取单链DNA作为模板进行测序,间接ELISA法检测不同单噬菌体与结核病患者和健康人IgG的结合情况,鉴定出阳性克隆.取收集的47份结核病患者和37份有卡介苗接种史的健康人血清标本,采用phage-ELISA法对获得的阳性单噬菌体进行初步验证,并对其中24份筛选用血清标本的检测结果进行分别统计.结果 通过3轮淘选,能与靶分子特异性结合的噬菌体得到明显富集.单噬菌体测序分析共获得12种共同序列.12种序列各取1个克隆扩增后进行间接ELISA检测,结果表明单噬菌体H12与结核患者IgG具有较高的亲和力（S/N≥2.1）,确定为阳性克隆.间接ELISA检测发现,单噬菌体H12对47份结核病患者血清标本的检出值（0.105±0.010）明显高于对37份健康人的检出值（0.070±0.005）,t=2.912,P〈0.0001.对其中筛选用12份结核病患者和12份健康人血清标本的检出值分别为0.144±0.016、0.052±0.004,差异同样具有统计学意义（t=5.69,P〈0.0001）.结论 利用噬菌体展示随机肽库淘选获得了结核特异性抗体结合肽,显示出与结核病患者IgG较特异的结合活性,为以多肽为基础探索新的结核病血清学诊断方法提供了依据.
- 杨焕森胡忠义刘忠华王洁沙巍杨华
- 关键词：分枝杆菌结核肽库免疫测定C肽
